**293T细胞培养指南**
293T细胞,又名293tsA1609neo,是源自293[HEK-293]细胞株,经过SV40T-antigen温度敏感基因插入而形成的高转化衍生株。
一、细胞基本信息
【细胞名称】 人胚肾细胞
【细胞别名】 Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; 293-T; Human Embryonic Kidney 293T
【种属来源】 人
【组织来源】 肾
【细胞形态】 上皮细胞样
【生长特性】 贴壁生长
【培养体系】 MEM + 10% FBS + 1% P/S
【传代比例】 1:2~1:4,每2-3天更换培养液
【培养条件】 气相: 95%空气 + 5%二氧化碳; 温度: 37℃
【冻存条件】 冻存液: 60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO; 存储条件: 液氮
【安全性】 建议在生物安全二级台内操作,并做好个人防护。
二、复苏及传代方法
1. 细胞株的复苏(冻存管)
- 将冻存管在37℃水浴中迅速完全融化,并适当轻轻摇晃以促进融化。快速而彻底的融化能够提高细胞复苏效果。
- 打开冻存管前,使用75%酒精擦拭其外壁。
- 将完全融化的细胞离心,或转移至无菌的15ml离心管中,进行400g离心5分钟,吸除上清液,注意不要吸走细胞沉淀。然后用新鲜的完全培养液重悬细胞,转移至培养皿中,混匀后置于CO2培养箱中,保持37℃培养。
- 第二天查看细胞的贴壁或生长状态,适时更换培养液。注意:如果无法及时复苏收到的冻存管,请将其置于-80℃或液氮中进行暂存,尽快复苏并培养。
2. 细胞株的复苏(T25瓶)
- 收到T25瓶后,脱外包装并用75%酒精擦拭瓶外壁。
- 将瓶子置于倒置显微镜下观察细胞状态,确认无异常后用移液器移去多余的培养液,置于CO2培养箱内培养过夜。
- 第二天视细胞的贴壁或生长状态,决定是否更换培养液或进行传代,传代比例参考1:2~1:4。
三、注意事项
1. 每支冻存管约含1×106个细胞,体积为1ml,预期存活率为60-90%。建议复苏至1个T25瓶或1个6cm培养皿中。如果复苏后存活率较低,可以消化后转移至35cm培养皿或T125瓶中,这样细胞生长会更佳。
2. 如果产品是常温运输的培养瓶中充满完全培养液的贴壁细胞,收到后:
(1) 及时记录是否有漏液或瓶身破损。
(2) 使用75%酒精擦拭培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。初次不要打开培养瓶盖,将细胞置于培养箱内静置培养2~4小时以稳定状态。
(3) 仔细阅读细胞说明书,了解相关信息。
(4) 静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照并记录状态。
3. 如果细胞密度超过85%,请尽快进行传代;如果悬浮细胞较多,请将培养瓶在培养箱中静置过夜以使悬浮细胞重新贴壁。如果收到的是常温运输的离心管装的悬浮细胞,可以直接转移至培养皿或培养瓶中继续培养。若培养液颜色正常,应保留原培养液并在首次更换时加入相同量的新鲜培养液,以避免因培养液或血清的差异导致细胞生长不良,确保其健康状态。
4. 细胞培养操作请在生物安全柜内进行,并严格遵守无菌操作规范。
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